④放射免疫剖析

放射免疫剖析(radioimmunoassay，RIA)是由Yalow R·S·和Berson S．A．于1954年建立的。該法運(yùn)用放射性物質(zhì)放射性核素(常見³H、¹²⁵I、³²P等)標(biāo)識(shí)抗原體或抗原，根據(jù)檢驗(yàn)放射性物質(zhì)抗壓強(qiáng)度對(duì)抗原體或抗原開展示蹤劑和檢驗(yàn)，具備檢驗(yàn)敏感度高(檢出限達(dá)ng至pg乃至fg級(jí))、非特異強(qiáng)、簡單好用的優(yōu)勢。但放射性物質(zhì)同位素標(biāo)記要在特別的試驗(yàn)室中開展，標(biāo)識(shí)較艱難，標(biāo)識(shí)和剖析中容易導(dǎo)致公害病。除此之外，因?yàn)榉派湫晕镔|(zhì)原素有一定藥物半衰期，易自主衰減系數(shù)且無法儲(chǔ)存，檢驗(yàn)時(shí)需用特別的實(shí)驗(yàn)儀器，在農(nóng)殘剖析中的使用遭受非常大限定，乃至趨于淘汰。

2、酶免疫力剖析

酶免疫力分析方法(erzyme immunoassay，EIA)是Engrall等于1966建立的。該法用特殊的酶(如乳酸脫氫酶、偏堿磷酸酯酶等)來標(biāo)識(shí)抗原體或抗原，運(yùn)用抗原和抗體反映的非特異和酶催化反應(yīng)顯色反應(yīng)的精確性對(duì)抗原和抗體反映開展示蹤劑和檢驗(yàn)。常見酶免疫力剖析包含酶抑止法(erlzynle inhibition，EI)、酶變大免疫測定法(enzyme—multipledimmlmoassay techniqtle，EMIT)和酶聯(lián)免疫吸咐測定方法(ELISA)。

(1)酶抑止法：此方法運(yùn)用相應(yīng)的酶標(biāo)識(shí)抗原體或抗原，酶標(biāo)識(shí)物在產(chǎn)生抗原和抗體一氧化氮合酶時(shí)，酶促反應(yīng)減少，根據(jù)測量酶促反應(yīng)的變動(dòng)對(duì)抗原和抗體反映開展檢驗(yàn)。酶抑止法是一種均相免疫力統(tǒng)計(jì)分析方法，方式簡單，既能夠用以檢驗(yàn)抗原，還可以用來檢驗(yàn)抗原體，但其敏感度較低。

(2)酶變大免疫測定法：此方法將酶標(biāo)識(shí)化肥半抗原、被測化肥及抗原添加反映管開展市場競爭融合反映，離心式除去結(jié)合物，上清液中多余的酶標(biāo)化肥半抗原量與被測化肥成分呈正比例。

在上清液中添加酶的底物和鉻黑T，酶促顯色反應(yīng)抗壓強(qiáng)度與被測化肥成分呈正比例。酶變大免疫測定法無需固相媒介，可重復(fù)性好，檢驗(yàn)速度更快。

(3)酶聯(lián)免疫吸咐測定方法：酶聯(lián)免疫吸咐測定方法是將抗原和抗體的非特異反映與酶對(duì)底物的高效率催化反應(yīng)緊密結(jié)合的一種敏感度很高的非均相免疫力剖析技術(shù)性。將抗原體或抗原固定不動(dòng)于固相(如聚乙烯微孔表層)，抗原和抗體反映均衡后，清洗去除不必要的分散物，融合在固相上的酶標(biāo)識(shí)物催化反應(yīng)底物反映使鉻黑T著色，根據(jù)測量酶促著色抗壓強(qiáng)度對(duì)抗原和抗體反映開展檢驗(yàn)。在具體運(yùn)用中，檢驗(yàn)生物大分子抗原體多采取雙抗原夾心巧克力等非市場競爭方式。檢驗(yàn)化肥、藥品等小分子水選用間接性市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法、包被抗原立即市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法和被子抗原立即市場競爭酶聯(lián)免疫吸咐測定方法。

現(xiàn)階段已創(chuàng)建了多種多樣內(nèi)吸性、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類等藥劑的酶聯(lián)免疫吸咐測定方法，有一些已開發(fā)設(shè)計(jì)成商業(yè)化免疫力診斷試劑盒。酶聯(lián)免疫吸咐測定方法是當(dāng)前使用較多的農(nóng)殘免疫力剖析技術(shù)性。

3、瑩光免疫力剖析

瑩光免疫力剖析(fluorescerlce immurtoassa3r，F(xiàn)IA)包含瑩光標(biāo)識(shí)免疫力剖析和酶標(biāo)識(shí)瑩光免疫力剖析?，摴鈽?biāo)識(shí)免疫力剖析是用相應(yīng)的瑩光化學(xué)物質(zhì)標(biāo)識(shí)抗原體或抗原，運(yùn)用抗原和抗體反映的非特異和瑩光檢驗(yàn)的高敏感度對(duì)抗原和抗體反映開展示蹤劑和檢驗(yàn)。經(jīng)典的瑩光免疫力剖析以有機(jī)化學(xué)瑩光分子結(jié)構(gòu)為標(biāo)識(shí)物，常見的有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocya-nate，F(xiàn)ITC)、四羥基異硫氰酸羅丹明(tetramethyl rh(Marnine isothic)cyanate，TRITC)等。酶標(biāo)識(shí)瑩光免疫力剖析是在酶標(biāo)識(shí)免疫力剖析選用瑩光底物替代生色底物，是現(xiàn)在非放射免疫剖析中敏感度較高的辦法之一。

瑩光免疫力剖析具備精確度高、易標(biāo)識(shí)、好儲(chǔ)存等優(yōu)勢?？墒谴蟛糠钟袡C(jī)化學(xué)瑩光化學(xué)物質(zhì)的熒光壽命短，在具體運(yùn)用中因?yàn)樵嚻?、?shí)驗(yàn)試劑的本身瑩光和激起光的散射等要素，造成 環(huán)境瑩光高，危害了測量的穩(wěn)定性和敏感度。

(1)非市場競爭方式：瑩光免疫力分析方法檢驗(yàn)抗原、顆粒物性或生物大分子抗原體一般選用非均相反映和非市場競爭方法，檢驗(yàn)辦法和基本原理如下所示。

①立即法：先固定不動(dòng)待測物(含抗原體或抗原的試品)，添加瑩光標(biāo)識(shí)抗原(或瑩光標(biāo)識(shí)抗原體)，開展免疫反應(yīng)。清洗除去分散物后開展瑩光檢驗(yàn)。如固相上融合了瑩光標(biāo)識(shí)抗原(或瑩光標(biāo)識(shí)抗原體)，說明固相上面有相對(duì)的非特異抗原體或特異性抗體存有，且瑩光抗壓強(qiáng)度與對(duì)應(yīng)抗原體或相對(duì)應(yīng)抗原的量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

②雙抗原夾心巧克力法檢驗(yàn)抗原體：先固定不動(dòng)抗原，添加待測物開展反映。清洗除去分散物后添加瑩光標(biāo)識(shí)的第二抗原。清洗除去分散物后開展瑩光檢驗(yàn)。如固相上融合了瑩光標(biāo)識(shí)物，說明有相對(duì)的非特異抗原體存有，且瑩光抗壓強(qiáng)度與被測抗原體量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

(2)市場競爭方式：化肥等小分子水化學(xué)物質(zhì)的瑩光免疫力剖析一般選用市場競爭方式，檢驗(yàn)辦法和基本原理如下所示。

①瑩光光的偏振免疫力剖析：瑩光光的偏振免疫力剖析(fluorescence polarization immulaoassay，F(xiàn)PIA)是一種運(yùn)用化學(xué)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)在水溶液中轉(zhuǎn)動(dòng)速度分子質(zhì)量尺寸呈反比例的特性檢驗(yàn)總體目標(biāo)剖析物的方式 。以合理的瑩光化學(xué)物質(zhì)標(biāo)識(shí)化肥半抗原，當(dāng)瑩光標(biāo)識(shí)物遭受一個(gè)平面圖偏振光直射時(shí)，假如分子結(jié)構(gòu)的短軸與付出的偏振光面平行面，消化吸收的偏振光數(shù)最多，分子結(jié)構(gòu)被激起。當(dāng)高自旋分子結(jié)構(gòu)返回激發(fā)態(tài)時(shí)，發(fā)送一個(gè)偏振光?，摴鈽?biāo)識(shí)物在水溶液中轉(zhuǎn)動(dòng)速率越快，發(fā)送的偏振光越弱。因?yàn)榉肿咏Y(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)動(dòng)的速度分子質(zhì)量尺寸呈反比例，因此偏振光變?nèi)醯乃脚c分子結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)動(dòng)的速率呈正比例。當(dāng)瑩光標(biāo)識(shí)化肥與相對(duì)應(yīng)抗原融合后，分子質(zhì)量明顯增大，轉(zhuǎn)動(dòng)速率顯著緩減，偏振光提高。當(dāng)待測水溶液中有總體目標(biāo)剖析化肥存有時(shí)，總體目標(biāo)剖析化肥與瑩光標(biāo)識(shí)化肥市場競爭融合抗原，使瑩光標(biāo)識(shí)化肥與抗原的融合降低，偏振光變?nèi)?，變?nèi)醯乃脚c被測化肥的含量在一定區(qū)域內(nèi)呈正比例。

②以瑩光提高和瑩光猝滅為基本的免疫力剖析：該法運(yùn)用抗原和抗體反映歷程中瑩光標(biāo)識(shí)物或瑩光底物產(chǎn)生瑩光提高或瑩光猝滅功效來檢驗(yàn)抗原體或抗原。

瑩光光的偏振免疫力剖析、以瑩光提高和瑩光猝滅為基本的免疫力剖析一般是均相免疫力剖析，方式簡單迅速、經(jīng)濟(jì)發(fā)展安全性，但環(huán)境的影響限定了方式的敏感度。

③時(shí)間辨別螢光免疫力剖析：時(shí)間辨別螢光免疫力剖析(tlmeresolution fluorescencc、immunoassav，TRFIA)以鑭系元素螯合物為瑩光標(biāo)識(shí)物或瑩光底物，運(yùn)用標(biāo)識(shí)的TRFIA物或底物的熒光壽命較長的特性，在環(huán)境瑩光消退后測量標(biāo)識(shí)物或底物的瑩光抗壓強(qiáng)度，可合理減少環(huán)境瑩光的影響，明顯提升 瑩光免疫力研究的敏感度，是二十世紀(jì)八十年代免疫力研究的一個(gè)關(guān)鍵提升。

4、電化學(xué)發(fā)光免疫力剖析

電化學(xué)發(fā)光是運(yùn)用化學(xué)變化歷程中形成的可以激起電化學(xué)發(fā)光劑(常見魯米諾以及化合物)發(fā)亮。電化學(xué)發(fā)光免疫力剖析(chemilumirlescence lmmunoassay，CLIA)是把電化學(xué)發(fā)光的高靈敏與免疫力研究的高可選擇性融合在一起的少量免疫力剖析技術(shù)性，包含電化學(xué)發(fā)光標(biāo)識(shí)免疫力剖析、酶標(biāo)識(shí)電化學(xué)發(fā)光免疫力剖析(底物發(fā)亮免疫力剖析)等。

(1)電化學(xué)發(fā)光標(biāo)識(shí)免疫力剖析：電化學(xué)發(fā)光標(biāo)識(shí)免疫力研究的機(jī)理和反映方式與放射免疫剖析基本一致，僅僅用電化學(xué)發(fā)光劑替代同位素標(biāo)記抗原體或抗原。電化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)識(shí)的抗原體或抗原與被測抗原或被測抗原體反映后經(jīng)分離出來、清洗等流程，最終根據(jù)測量亮度單位來明確待測物的成分。

(2)酶標(biāo)識(shí)電化學(xué)發(fā)光免疫力剖析：酶標(biāo)識(shí)電化學(xué)發(fā)光免疫力研究的機(jī)理和反映方式與酶聯(lián)免疫吸咐測定方法基本一致，僅僅用電化學(xué)發(fā)光劑替代鉻黑T，以檢驗(yàn)電化學(xué)發(fā)光替代色度測量。

電化學(xué)發(fā)光免疫力研究的檢驗(yàn)敏感度能夠與放射免疫剖析匹敵，方式簡單迅速?，F(xiàn)階段，電化學(xué)發(fā)光免疫力剖析出現(xiàn)的首要情況是被測試品中別的成分的環(huán)境影響大，危害定量分析測量效果的精確度。