2.4 PCI2體細(xì)胞中的ROS水準(zhǔn)及MDA成分

ROS關(guān)鍵來自損害的膜蛋白，當(dāng)體細(xì)胞內(nèi)造成過多的ROS或身體氧化物成分超出體細(xì)胞的抗氧化性回復(fù)工作能力時(shí)，體細(xì)胞便會(huì)造成氧化應(yīng)激。本實(shí)驗(yàn)以DCFH-DA做為熒光探針，檢驗(yàn)2’，7’-二氯熒光素(DCF)的瑩光抗壓強(qiáng)度就可以得知體細(xì)胞內(nèi)ROS的水準(zhǔn)。與空缺對(duì)照實(shí)驗(yàn)對(duì)比，90μmol/LH202解決PCI2體細(xì)胞4h后，體細(xì)胞內(nèi)ROS水準(zhǔn)明顯提升(P＜0.01)，做到460.43％(圖4a)，使人體細(xì)胞造成明顯的空氣氧化損害；經(jīng)脂溶性提取液預(yù)備處理后，可以明顯地抑止PCI2體細(xì)胞內(nèi)ROS的造成(P＜0.01)，在其中2mg/L脂溶性提取液預(yù)備處理體細(xì)胞8h后，ROS成分為208.37％。光學(xué)顯微鏡觀查上色后的PCI2體細(xì)胞發(fā)覺，體細(xì)胞展現(xiàn)的瑩光抗壓強(qiáng)度轉(zhuǎn)變與組織細(xì)胞內(nèi)ROS水準(zhǔn)趨勢(shì)分析一致(圖4b)。因而，脂溶性提取液能夠合理地消除ROS，減輕H202引起的線粒體功能阻礙。
 

當(dāng)小動(dòng)物或植物細(xì)胞造成氧化應(yīng)激時(shí)，會(huì)產(chǎn)生脂類空氣氧化，而MDA是一種生物脂類空氣氧化的天然藥物化學(xué)，能夠用于明確脂類空氣氧化水準(zhǔn)。與空缺對(duì)照實(shí)驗(yàn)對(duì)比，90μmol/LH₂0₂解決PCI2體細(xì)胞4h后，MDA成分明顯增加(P＜0.01)，做到192.98％(圖5)；經(jīng)脂溶性提取液預(yù)備處理8h后，可以明顯地阻攔MDA的造成(P＜0.01)；而一切正常體細(xì)胞經(jīng)脂溶性提取液解決后，在無H₂0₂損害的情形下，其MDA成分可減少至25.71％。

2.5 脂溶性提取液對(duì)PCI2細(xì)胞壞死的危害

為了更好地進(jìn)一步研究脂溶性提取液能不能合理地抑止細(xì)胞壞死，運(yùn)用AnnexinV-FITC/PI開展上色，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢驗(yàn)細(xì)胞壞死率(圖6a)。如圖所示6b所顯示，與空缺對(duì)照實(shí)驗(yàn)(8.14％)對(duì)比，H₂0₂解決明顯提高了細(xì)胞壞死率(23.66％)，經(jīng)朝鮮薊脂溶性提取液預(yù)備處理后，PCI2體細(xì)胞的細(xì)胞凋亡獲得明顯抑止。在其中，歷經(jīng)2mg/L脂溶性提取液預(yù)維護(hù)后，細(xì)胞壞死率減少至8.75％。

為了更好地更為直接地較為不一樣解決組的細(xì)胞壞死狀況，運(yùn)用A0-EB對(duì)體細(xì)胞開展上色，根據(jù)光學(xué)顯微鏡觀查體細(xì)胞形狀。如圖所示6c所顯示，空缺對(duì)照實(shí)驗(yàn)的體細(xì)胞由于吖啶橙(A0)通過其詳細(xì)的細(xì)胞質(zhì)置入DNA，基本上所有展現(xiàn)翠綠色瑩光，體細(xì)胞形狀一切正常。沒有顯著的細(xì)胞凋亡有關(guān)組織學(xué)更改；經(jīng)H202解決的實(shí)體模型組的體細(xì)胞發(fā)生了弱化、核凝結(jié)等發(fā)翠綠色瑩光的初期細(xì)胞凋亡狀況，而且由于溴化乙錠(EB)通過其受損的細(xì)胞質(zhì)置入DNA，展現(xiàn)出橘黃瑩光的末期細(xì)胞凋亡狀況：而歷經(jīng)朝鮮薊脂溶性提取液預(yù)備處理的PCI2體細(xì)胞展現(xiàn)出初期細(xì)胞凋亡和末期細(xì)胞凋亡體細(xì)胞皆有降低的狀況，并展現(xiàn)濃度值依賴感。

3 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)研究了朝鮮薊副產(chǎn)品中脂溶性提取液對(duì)PCI2神經(jīng)元細(xì)胞的保障功效。運(yùn)用GC-MS對(duì)朝鮮薊副產(chǎn)品中萜類及谷甾醇類物質(zhì)開展判定與定性分析，結(jié)果顯示，關(guān)鍵帶有3種倍半萜內(nèi)脂，2種谷甾醇及8種五環(huán)三萜。實(shí)驗(yàn)以H202做為空氣氧化損害誘導(dǎo)劑，研究朝鮮薊副產(chǎn)品脂溶性提取液的身理活力，發(fā)覺該提取液可減少PCI2神經(jīng)元細(xì)胞的空氣氧化損害，而且隨著體細(xì)胞內(nèi)LDH露出率、MDA成分及ROS水準(zhǔn)的減少。歷經(jīng)AnnexinV-FITC/PI雙染及A0-EB雙染后發(fā)覺，經(jīng)脂溶性提取液解決的PCI2細(xì)胞壞死率明顯減少，與光學(xué)顯微鏡的觀測(cè)結(jié)果一致。綜上所述，朝鮮薊副產(chǎn)品脂溶性提取液對(duì)PCI2神經(jīng)元細(xì)胞具備抗細(xì)胞凋亡及防護(hù)功效，非常值得進(jìn)一步的綜合利用與科學(xué)研究。